راه‏اندازی یک روش جدید سریع و حساس nested pcr یک مرحله‏ای-یک لوله‏ای در سیستم بسته با استفاده از دو آغازگر متصل به هم برای تشخیص ویروس hcv

هدف: واکنش زنجیر پلیمراز یکی از مهم‏ترین پیشرفت‏ها در زمینه زیست‏شناسی و تشخیص مولکولی است. با وجود سادگی در مفهوم این روش نیازمند کنش‏های پیچیده بین توالی هدف، آغازگرها، dntp و آنزیم پلیمراز به‏منظور تکثیر و تشخیص موفق است. شناسایی ویروس‏های rna دار نیازمند استفاده از روش‏هایی با حساسیت و ویژگی بالا است، بنابراین تکثیر براساس روش nested pcr تا حدی منجر به بهبود حساسیت شده و از سوی دیگر، یک مرحله‏ای کردن روش مذکور باعث کاهش آلودگی‏های احتمالی خواهد شد. هدف از مطالعه حاضر راه‏اندازی و به‏کارگیری روش جدید، سریع و حساس nested pcr یک مرحله‏ای- یک لوله‏ای در سیستم بسته با استفاده از دو آغازگر به هم چسبیده است. مواد و روش‏ها: در این مطالعه، روش جدید و ویژه‏ای از طراحی آغازگر به‏منظور یک مرحله‏ای- یک لوله‏ای کردن واکنش استفاده شد. روش طراحی شده پس از راه‏اندازی و بهینه‏سازی، روی نمونه‏های کنترل مثبت و منفی ارزیابی شد. نتایج: روش راه‏اندازی شده، روی50 نمونه مثبت ویروس هپاتیت c، 10 کنترل منفی ژنوم انسانی و 5 نمونه از هرکدام از ویروس‏های هپاتیت b، نقص ایمنی اکتسابی انسان، هپاتیت g و تورکوتنو انجام گردید. براساس نتایج به‏دست آمده از مجموع آزمایشات میزان حساسیت و ویژگی روش طراحی شده، محاسبه شد. در 48 مورد از 50 نمونه مثبت باند مورد انتظار مشاهده گردید و در هیچ‏یک از نمونه‏های کنترل منفی باندی مشاهده نشد. نتیجه‏گیری: براساس سیستم ویژه طراحی آغازگر که در مطالعه حاضر استفاده شد، آغازگرهای داخلی به‏صورت مکمل حالت معمول pcr و چسبیده به آغازگرهای خارجی ساخته می‏شوند. احتمال اتصال آغازگرهای خارجی و داخلی به الگوهای نادرست در هر دو دور واکنش غیرممکن می‏شود و در نتیجه باندهای غیراختصاصی تولید نخواهد شد. برتری دیگر روش طراحی شده عدم وجود آلودگی به دلیل یک مرحله‏ای شدن و علاوه بر آن؛ کوتاه‏تر شدن زمان واکنش و نیز کاهش هزینه‏ها است.